簡介

使用熒光染料標記生物組分，然后利用光學顯微鏡（如共聚焦顯微鏡）獲取熒光圖像的方法，已成為觀察生物組織和細胞分子定位的常用實驗方法。

然而，由于顯微物鏡中透鏡組造成的光學色差，常會導致難以使用紫外光和近紅外區域中的熒光染料，在同一標本中精確顯示不同組分在細胞內的準確的共定位關系。使用EVIDENT超色差校準物鏡PLAPON60XOSC，即使熒光標記橫跨紫外和近紅外區域，也能以幾乎沒有色差的方式準確顯示熒光標記分子定位情況。下面介紹在單個標本中使用四種類型熒光抗體，仍然可以準確可視化熒光標記分子的共定位分析的案例。

超色差校準物鏡的應用-腦組織的四色免疫熒光

腦組織的四色免疫熒光：圖（1）

VIAAT染色（Alexa Fluor405，藍色）

CB1染色（Alexa Fluor488，綠色）

VGluT3染色（Cy3，紅色）

腦組織的四色免疫熒光：圖（2）

VIAAT染色（Alexa Fluor405，藍色）

CB1染色（Alexa Fluor488，綠色）

VIP染色（Cy3，紅色）

GABAergic籃狀細胞有兩種表達大麻素受體CB1并控制錐體細胞胞體的亞型，一種亞型表達膽囊收縮素（CCK），另一種表達血管活性腸肽（VIP）。這種四色免疫熒光染色顯示，在高表達CB1（綠色）和VIAAT（藍色）的陽性神經末梢（紅色）周圍缺乏DGLα（白色），這表明VIP陽性神經末梢不參與侵入性突觸的形成。比例尺：5 μm。

FV3000

• 配有常規掃描單元的FV3000或配有常規/共振混合掃描單元的FV3000RS

• 可在所有通道進行高效、準確的全真光譜檢測

• 可針對活細胞進行優化的高靈敏度和低光毒性成像

• 可根據各種應用和樣品類型靈活選擇倒置和正置機身

這種超色差校準物鏡可校正大范圍的色差，采集的圖像可以準確反應熒光信號定位。它可大幅度校正2D和3D圖像中的橫向和軸向色差，從而為共定位分析帶來可靠性和準確度。

• 大限度補償色差

• 每一個物鏡都附帶實測色差數據，405 nm到650 nm之間的軸向色差小于0.1 μm

• 適合嚴格共定位分析或超分辨率成像

結論：

如圖（1）和（2）所示，針對多種功能分子和細胞標志物的四色免疫熒光提供有關細胞表達和亞細胞定位的詳細信息，其中包括相關功能細胞與細胞間空間距離的相互依賴或獨立關系。更為重要的是，顯微鏡的檢測靈敏度和分辨率，以及能夠盡可能減小色差的物鏡光學性能是實現免疫熒光目標的重要因素。

doi：10.1523/JNEUROSCI.4681-14.2015。

2023年，我們開啟了全新欄目【實驗大比拼】，期望與您分享具有挑戰、多元、新穎等的實驗方法，為您提供幫助。

Evident生命科學業務致力于通過臨床研究、教學和先進的顯微鏡系統，助力研究人員和科學家在科研工作中取得更大的進步，為中國的科研工作和生命健康產業的發展貢獻更多力量。