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	細胞克隆形成實驗
當單個細胞在體外增殖6代以上,其后代所組成的細胞群體,成為集落或克隆。每個克隆含有50以上的細胞,大小在0.3-1.0mm之間。集落形成率表示細胞的獨立生存能力。
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實驗介紹 

       當單個細胞在體外增殖6代以上,其后代所組成的細胞群體,成為集落或克隆。每個克隆含有50以上的細胞,大小在0.3-1.0mm之間。集落形成率表示細胞的獨立生存能力。各種理化因素可能導致細胞的克隆形成能力發生改變。通過一定的實驗方法可以對細胞的克隆形成能力進行檢測。

實驗方法:

      平板集落形成實驗、軟瓊脂集落形成實驗

 (a) 平板集落形成實驗:本法適用于貼壁生長的細胞和正常培養的細胞

 (b) 軟瓊脂集落形成實驗:本法適用于非錨著依賴性生長的細胞,如骨髓造血干細胞、腫瘤細胞株、轉化細胞系。

注意事項:

 (a) 瓊脂對熱和酸不穩定,若反復加熱,容易降解而產生毒性,且硬度下降。因此高壓滅菌后應進行分裝;

 (b) 細胞在進行克隆形成實驗時要求有95%以上的分散度,否則結果的準確度會受到很大影響;

 (c) 軟瓊脂與細胞混合時溫度不能超過40℃,否則將會燙傷/死細胞;

 (d) 接種時細胞密度適度,不可過高。

細胞在低密度、非貼壁狀態條件下培養,生存率明顯下降,永生細胞系/株克隆形成率可達到10%以上,但初代培養細胞和有限傳代細胞系克隆形成率僅為0.5%-5%,甚至無法形成單個克隆。因此,為了提高克隆形成率,有時需要在培養基中添加胰島素、地塞米松等促克隆形成物質。

細胞接種存活率只表示接種細胞后貼壁的細胞數,但貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆。而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。克隆形成率反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。由于細胞生物學性狀不同,細胞克隆形成率差別也很大,一般初代培養細胞克隆形成率弱,傳代細胞系強;二倍體細胞克隆形成率弱,轉化細胞系強;正常細胞克隆形成率弱,腫瘤細胞強。并且克隆形成率與接種密度有一定關系,做克隆形成率測定時,接種細胞一定要分散成單細胞懸液,直接接種在碟皿中,持續一周,隨時檢查,到細胞形成克隆時終止培養。

收費標準

服務周期:1-2個月

【本平臺合作項目】

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