產(chǎn)品定義

熒光差異雙向凝膠電泳（DIGE）是一種在2D電泳之前標(biāo)記蛋白質(zhì)樣品的方法，可以對樣品間蛋白質(zhì)豐度進行精確分析。

技術(shù)原理

Ettan DIGE熒光差異蛋白質(zhì)表達(dá)分析系統(tǒng)在傳統(tǒng)雙向凝膠電泳技術(shù)的基礎(chǔ)上，結(jié)合多重?zé)晒夥治龅姆椒ǎ�在同一塊膠上共同分離多個分別由不同熒光標(biāo)記（Cy2，Cy3，Cy5）的樣品，并且第一次引入內(nèi)標(biāo)的概念，極大地提高結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和重復(fù)性。在DIGE實驗中，每個蛋白質(zhì)點都有它自己的內(nèi)標(biāo)，并且軟件全自動根據(jù)每個蛋白質(zhì)點的內(nèi)標(biāo)對其表達(dá)量進行校準(zhǔn)，保證所檢測到的蛋白質(zhì)豐度變化是真實的。

Ⅰ 熒光染料采用分子量和等電點相互匹配的三種熒光標(biāo)記分子Cy2、Cy3、Cy5，其特殊設(shè)計的NHS脂活性基團通過氨基酸橋連接作用于蛋白質(zhì)的賴氨酸上，使檢測靈敏度達(dá)到125pg。

Ⅱ Cy2標(biāo)記所有樣品的等量混合樣作為內(nèi)標(biāo)，理論上包含了需要分析樣品的所有蛋白質(zhì)點，存在于每一塊需要被分析的膠中。采用專業(yè)軟件對蛋白質(zhì)點作出更加可觀的定量變化分析。

實驗流程

                                                                                              注釋：“樣品及實驗預(yù)判”包括蛋白質(zhì)定量、至少一次

                                                                                              雙向凝膠電泳實驗，對樣品質(zhì)量判斷及實驗條件優(yōu)化。

技術(shù)優(yōu)勢

相對應(yīng)傳統(tǒng)的雙向電泳技術(shù)，檢測靈敏度更高，大大節(jié)約樣品；

采用內(nèi)標(biāo)對數(shù)據(jù)進行歸一化處理，消除膠與膠之間差異造成的誤差，準(zhǔn)確度高。

應(yīng)用領(lǐng)域

疾病標(biāo)志物篩選                    作用機制研究

植物抗逆研究                       藥物作用靶點研究

特殊功能蛋白質(zhì)篩選

樣品需求

技術(shù)參考案例

[1]    Samuel MA, Tang W, et al. Proteomic analysis of Brassica stigmatic proteins following the self-incompatibility reaction reveals a role for microtubule dynamics during pollen responses. Mol Cell Proteomics. 2011; 10(12).

[2]    De la Cuesta F, Alvarez-Llamas, et al. A proteomic focus on the alterations occurring at the human atherosclerotic coronary intima. Mol Cell Proteomics. 2011; 10(4).

[3]    Hong Y, Peng J, et al. Proteomic analysis of Schistosoma japonicum Schistosomulum proteins that are differentially expressed among hosts differing in their susceptibility to the infection. Mol Cell Proteomics. 2011; 10(8).