外泌體（Exosomes）是大小為30-150nm，具有磷脂雙分子層膜結構的微小囊泡。外泌體可攜帶豐富的RNAs、脂質、蛋白質等生物活性分子，參與細胞間的通訊與調控。從外泌體研究專業數據庫——ExoCarta和Vesiclepedia中記錄的數據可以看出，外泌體攜帶的蛋白質的豐富程度尤為突出。外泌體蛋攜帶的蛋白質是外泌體標志物、外泌體載藥、外泌體分子機制研究的主要分子抓手。

 

 

      外泌體蛋白質也是登錄CNS正刊最多的研究對象。除此之外，外泌體蛋白尤其是膜蛋白具有非常重要的臨床轉化價值，也是臨床轉化研究中的新寵。組織外泌體與血漿外泌體比對分析也成為發現新型疾病標志物的經典實驗方案。

      在外泌體蛋白標志物相關研究中，血漿/血清樣本是主要研究載體。然而，血漿/血清中含有大量的載脂蛋白，如高密度脂蛋白質HDL，低密度脂蛋白質LDL，極低密度脂蛋白VLDL，乳糜微粒CM等。外泌體與這些脂蛋白質在物化性質上具有較大的相似性。常規的外泌體分離方法，如超速離心和沉淀法等都無法有效去除血漿/血清中的脂蛋白，嚴重干擾了下游質譜實驗數據的檢出率和可靠性。同時，實驗樣本來之不易，如何盡可能利用更少的樣本獲得更可靠的實驗數據，成為外泌體蛋白質組學研究科研群體共同面對的技術問題。

|   外泌體蛋白質組服務

       華盈生物開發了一套完整的外泌體蛋白質組學研究技術服務體系，針對不同類型的樣本分別采用專屬的外泌體提取方法，如超速離心、尺寸排阻、密度梯度離心等。同時，對蛋白質組學實驗前處理進行了系統性創新優化，將樣本用量降低的同時獲取高質量數據，如利用0.5mL血漿即可完成外泌體的分離與蛋白質組篩選工作。

       在樣本使用量和檢出蛋白數上，華盈生物的技術平臺不斷沖擊外泌體蛋白質組學的檢測的上限。例如：在人外泌體血漿蛋白組鑒定歷史記錄已達到2336種蛋白質，并且這個數據記錄每天都可能被再次突破。截止目前，華盈生物已經完成超過30種樣品類型的樣品外泌體制備與分析。對于特殊樣本如：胃液、腦積液、腦脊液、膽汁、微生物培養液、植物培養液等，也累積了豐富的項目經驗，可承接復雜樣品和項目的研究服務需求。

       對于外泌體蛋白質組學研究來說，外泌體的純度至關重要。在組織外泌體等熱點研究領域，華盈生物經過系統的研發和比對分析，開發出的組織外泌體分離純化方法可顯著提高外泌體的純度，達到Top雜志的要求。

        華盈生物擁有質譜技術和抗體芯片兩大平臺，針對不同的研究需求，選擇更優的技術。質譜技術對于鑒定能夠在外泌體中攜帶的新蛋白（尤其是膜蛋白）具有顯著優勢，而抗體芯片則利用抗原抗體反應的特異性原理，對于外泌體中攜帶的分泌型的蛋白的鑒定更加靈敏和準確（抗體芯片目前可檢測超過500種分泌蛋白）。

|   經典案例：血漿外泌體S100-A9蛋白激活NF-κB促進淋巴瘤復發

血漿中的外泌體蛋白既可以當作標志物，也可以進行機理研究？

       首先，研究人員將慢性淋巴瘤（CLL）患者分為2個亞組：疾病進展期和疾病慢性期。然后利用質譜技術分析了患者血漿外泌體蛋白質組，發現S100-A9蛋白在進展期CLL患者中明顯高表達，可以作為CLL進展期診斷的輔助標志物。進一步，研究人員通過生信分析發現進展期CLL患者外泌體中的高表達蛋白質主要與炎癥和氧化應激有關，而NF-κB通路正是承接此效應的關鍵通路。通過從進展期CLL患者中分離富含S100-A9蛋白的外泌體加入CLL患者的PBMC細胞中，證實了S100-A9+外泌體能夠明顯促進進展期CLL患者PBMC細胞中IκBα蛋白的磷酸化上調，進一步激活NF-κB通路。

      該研究證通過血漿外泌體蛋白組分析不僅找到輔助診斷進展期CLL的標志物，并證實了S100-A9+外泌體可通過形成正向反饋調控，不斷激活進展期CLL患者自身PBMC細胞中的NF-κB通路，促進CLL進展的特殊機理。

|   客戶文獻

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