檢測原理:雙色熒光探針分別檢測端粒酶催化亞基TERT基因mRNA和內參基因GAPDH mRNA。在進行樣本檢測時,同時檢測陽性細胞293T和陰性MRC-5細胞做為對照,利用∆∆CT法計算樣本中TERT基因的相對表達量。
檢測所用試劑及儀器
1. 檢測所用試劑
RNA抽提試劑盒:FineProtect通用型RNA提取試劑盒(Code No.203,濟凡生物科技(常州)有限公司,中國)
RNA逆轉錄試劑盒: RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit(00820611,Thermo scientific,Germany)
雙色熒光TERT基因檢測試劑盒:自研
陽性對照:293T細胞
陰性對照:MRC-5細胞(正常的人胚肺細胞)
2. 檢測所用主要儀器
熒光定量PCR: Real Time PCR System(SLAN-96S,中國)
RNA質控:Nanodrop 2000C Spectrophotometer(Thermo scientific,Germany)
判讀標準
1. 陽性對照4倍稀釋后TERT基因Ct值在25±3,內參基因Ct值在17±3,8倍稀釋后TERT基因Ct值在26±3,內參基因Ct值在18±3,對照品
端粒酶活性為陽性,顯示實驗穩定檢出陽性樣本的
TERT基因表達量。
2. 陰性對照經4倍、8倍梯度稀釋后,TERT基因Ct值≥35(或檢測不到),內參基因Ct值仍在18±3之間,陰性對照品端粒酶活性為陰性。
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