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大鼠膠質(zhì)細(xì)胞酸性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

 (用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))

原理

本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 GFAP 單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 GFAP與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗大鼠GFAP，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，最后加終止液硫酸，在450nm處測(cè)OD值，GFAP濃度與OD值成正比，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中GFAP濃度。

試劑盒組成（2-8℃保存）

準(zhǔn)備試劑與收集血樣

1.          收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)，2-8℃保存48小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反復(fù)凍融。

2.          標(biāo)準(zhǔn)品液配制：設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管7管，每管加入標(biāo)本稀釋液300ul。在第一管中加入100ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul，移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋，從第六管中吸出300ul棄去。第七管為空白對(duì)照。加上原液管總共八管。

3.          10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。

4.         洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）

檢測(cè)程序

1.          加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。

2.          洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。

3.          每孔中加入第一抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。

4.          洗板：同前。

5.          每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。

6.          洗板：同前。

7.          每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應(yīng)15分鐘。

8.          每孔加入100ul終止液混勻。

9.          30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。

結(jié)果計(jì)算與判斷

1.          所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。

2.          以標(biāo)準(zhǔn)品100、50、25、12.5、6.25、3.12、1.56、0 ng/ml為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.          根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)GFAP含量。

試劑盒性能

             1.   靈敏度：最小的GFAP 檢測(cè)濃度小于1ng/ml。

2.        特異性：可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的大鼠GFAP。不與大鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。

3.        重復(fù)性：板內(nèi)、板見(jiàn)變異系數(shù)均小于10％。

注意事項(xiàng)

             1.   以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

 2.   洗滌過(guò)程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。

             3.   板條開(kāi)封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。

             4.   本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

 5.   本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！