一種基于量子點探針和側向流層析的快速靈敏的檢測禽流感病毒的方法

摘要：我們開發(fā)了一種新的快速、超靈敏的檢測禽流感病毒的熒光免疫檢測方法，該方法整合了側向流層析技術和無標記、高發(fā)光的量子點新材料。通過對側向流試紙條上進的的夾心免疫反應，金納米粒子標簽在檢測線上被捕獲，同時被釋放的大量金粒子作為信號轉導的橋梁，被量子點通過熒光淬滅的方法檢測到。在最佳的條件下，量子點熒光強度在AIV 0.27-1.2ng/ml的范圍內(nèi)呈線性關系。檢測極限達到0.09ng/ml，比ELISA高出100倍。其靈敏度和特異性反應具有較高的重復性。六組平行檢測重復性熒光信號產(chǎn)生的行動標準差為4.7%。該方法能夠直接用于臨床樣品檢測，而不需要預處理。與病毒分離（膠體金）方法相比，該方法具有高效率（90.0%）、高靈敏度（100.0%）、高特異性（88.2%）的優(yōu)點。新的方法能夠快速、靈敏的定量檢測禽流感病毒，在醫(yī)療診斷領域具有較好的前途。

 

1、 采用熒光免疫分析方法檢測禽流感病毒的原理圖

2、膠體金與禽流感病毒抗體偶聯(lián)效果，與偶聯(lián)前相比，偶聯(lián)后吸收峰出現(xiàn)紅移，吸收峰波長變大，通過電鏡成像分析，偶聯(lián)后直徑變大

3、采用負染色電鏡成像技術顯示膠體金與AIV抗體偶聯(lián)物與抗原AIV結合后，整體直徑變大，通過膠體金定性分析，T線有明顯條帶，說明在T線中發(fā)生抗體抗原免疫反應。

4、不同的金離子濃度對I₀/I的影響，隨著金離子濃度的升高，I值會逐漸降低，比值逐漸升高

5、HCL和Br2對溶解釋放出金離子最佳濃度的優(yōu)化，最后選擇0.15mol/L HCl 和0.8mol/L/Br2復合物

 

6，AIV濃度與量子點相對熒光強度的關系圖，在0.27–12 ng /mL內(nèi)呈直線關系，線性關系很好隨著AIV濃度的增加，逐漸趨向水平

7，文章提供的方法與幾種AIV常規(guī)檢測方法對比，靈敏度高很多

 

8，通過檢測20種臨床樣品，與病毒分離方法相比，文獻提供的方法擁有其90.0%的效率，100.0% 靈敏度和and 88.2%特異性。