二苯胺DNA比色法定量測定試劑盒產品說明書

主要用途

二苯胺DNA比色法定量測定試劑是一種旨在通過二苯胺與DNA的特異性結合反應，借助可見光波長的吸光峰值的變化，比色測定樣品中DNA的絕對含量或濃度的技術方法。其適用于各種原核生物和真核生物的細胞或組織DNA以及環(huán)境中DNA含量分析。產品即到即用，性能穩(wěn)定，簡易方便，無需樣品純化，定量準確。

技術背景

二苯胺（diphenylamine）具有與DNA酸性水解脫嘌呤后釋放的脫氧核糖（deoxyribose）轉變的ω-羥基菊芋糖醛（ω-hydroxylevulinyl aldehyde）特異性反應的功能，形成藍色復合物。但不與RNA的核糖 （ribose）反應。通過可見光（600nm）吸收可以進行定量分析。因此避免了A260測定的種種限制，例如對樣品的純化要求、對DNA的單鏈雙鏈的要求和對紫外光UV的需求，以及RNA的干擾。

產品內容

緩沖液（Reagent A）  8毫升

分解液（Reagent B）  8毫升

反應液（Reagent C） 25毫升

穩(wěn)定液（Reagent D）     125微升

標準液（Reagent E）       200微升

產品說明書                     1份

保存方式

保存穩(wěn)定液（Reagent D）和標準液（Reagent E）在4℃冰箱里，其余的保存在室溫下；其中反應液（Reagent C）和穩(wěn)定液（Reagent D），具有腐蝕性，注意操作安全，且避免光照，有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

恒溫水槽：用于反應物孵育

比色皿：用于比色分析的容器

分光光度儀：用于樣品比色測定

實驗步驟

• 測定準備
• 準備好待測樣品，置于冰槽里
• 設定好分光光度儀：波長600nm，并置零
• 準備好9個1.5毫升離心管，標記為1至9號管
• 按照下表配制標準液
• 放進冰槽里備用，避免光照

二、比色測定

實驗開始前，小心移取6毫升反應液（Reagent C）和30微升穩(wěn)定液（Reagent D）到15毫升錐形離心管，混勻后，標記為反應工作液，避免光照。然后進行下列操作。

• 準備至少10個新的1.5毫升離心管作為測定管：標記9個標準管和1個待測樣品管
• 分別加入140微升緩沖液（Reagent A）到每一個標準管和樣品管
• 分別加入10微升上述配制的標準液（Reagent E）到相應測定管里（注意：濃度和管號對號入座）
• 加入10微升待測樣品到樣品管里
• 分別加入150微升分解液（Reagent B）到所有測定管里
• 放進70℃干式恒溫槽或恒溫水槽孵育20分鐘
• 在室溫下靜置，直至試管溫度降溫到室溫（15至30分鐘）
• 分別加入600微升含有反應液（Reagent C）和穩(wěn)定液（Reagent D）的反應工作液到所有測定管里
• 放進37℃培養(yǎng)箱（暗室環(huán)境）孵育5小時
• 即刻分別移入到1毫升比色皿，放進分光光度儀讀數：獲得吸光讀數
• 構建標準曲線：縱座標（Y軸）為吸光單位（OD）；橫座標（X軸）為標準DNA濃度（微克/10微升）
• 根據標準曲線獲得樣品對應DNA濃度（微克/10微升）
• 樣品實際DNA濃度：

[根據標準曲線獲得樣品對應DNA濃度（微克/10微升）X樣品稀釋倍數]÷100＝微克/毫升

注意事項

• 本產品為10次樣本操作
• 操作時，須戴手套
• 系統(tǒng)操作時，標準樣品測定只需1次
• 反應液（Reagent C）、穩(wěn)定液（Reagent D）和反應工作液，避免光照
• 操作時注意安全，尤其在使用反應液（Reagent C）、穩(wěn)定液（Reagent D）和反應工作液時，十分小心
• 待測樣品無需純化，包括去蛋白、去RNA等處理
• 計算實際濃度時，不要忘記待測樣品的稀釋倍數
• 使用無水乙醇清洗比色皿
• 本公司提供系列DNA定量分析試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩(wěn)定
• 本產品經鑒定定量準確