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ELISA方法的基本類型、用途及操作程序

瀏覽次數:5546 發布日期:2018-3-26  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

ELISA方法的基本類型、用途及操作程序

1、直接ELISA試劑盒

    本法首要用于檢測抗體。以鴨病毒性肝炎(DVH)抗體的ELISA為例,直接ELISA的操作程序如下:

(1) 資料

① 包被液、洗刷液、保溫液、底物液、停止液;

② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參閱血清;待檢鴨血清;

③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。

(2) 方法過程

① 加抗原包被 → 4℃過夜,洗刷三次、拋干

② 加待檢血清 → 37℃ 2小時,洗刷三次、拋干

③ 加酶標抗體 → 37℃ 2小時,洗刷三次、拋干

④ 加底物液 → 37℃ 30分鐘,加停止液

⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值,并計算出P/N比值。

(3) 成果判定 已知陽性血清與已知陰性血清的比值(P/N)≥2.1,并且已知陽性血清的OD值≥0.4;在上述條件建立的情況下,如果待檢血清與已知陰性血清的比值(P/N)≥2.1,并且待檢血清的OD值≥0.4,則判為陽性,不然判為陰性。

2、雙抗體夾心ELISA試劑盒

    本法首要用于檢測大分子抗原。現以檢測雞傳染性法氏囊病病毒(IBDV)的雙夾心抗體ELISA為例介紹本法的操作程序。

① 加抗體包被 → 4℃過夜,洗刷三次、拋干

② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘,洗刷三次、拋干

③ 加酶標抗體 → 37℃ 30分鐘,洗刷三次、拋干

④ 加底物液 → 37℃ 15分鐘,加停止液

⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值。

3、雙夾心ELISA試劑盒

    此法與雙抗體夾心ELISA的首要差異在于:它是采用酶標抗抗體查看多種大分子抗原,它不只不用符號每一種抗體,還可進步試驗的敏感性。

此法的根本程序為:

① 加抗體(Ab-1)包被 → 4℃過夜,洗刷三次、拋干

② 加待檢抗原(Ag) → 37℃ 60分鐘,洗刷三次、拋干

③ 加用非同種動物出產的特異性抗體(Ab-2)→ 37℃ 60分鐘,洗刷三次、拋干

④ 加入酶標抗Ab-2抗體(AB-3)→ 37℃ 60分鐘,洗刷三次、拋干

⑤ 加底物液 → 37℃ 20分鐘,加停止液

⑥ 用ELISA檢測儀測定OD值。

發布者:上海信裕生物工程有限公司
聯系電話:021-60526354
E-mail:shxysw02@163.com

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