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試劑盒酶的底物分類

瀏覽次數:5368 發布日期:2018-3-26  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

試劑盒酶的底物

酶的底物 
1.3.3.1 HRP的底物 HRP催化過氧化物的氧化反應,最具代表性的過氧化物為H2O2,其反應式如下:DH2+ H2O2 D+ H2O上式中,DH2為供氧體,H2O2為受氫體。

2.在ELISA試劑盒中,DH2一般為無色化合物,經酶作用后成為有色的產品,以便作比色測定。常用的供氫體有鄰苯二胺(O-phenylenediamine, OPD)、四甲基聯苯(3,3",5,5tetramethylbenzidine, TM和ABTS[2,2"-azino-di-(3- ethylbenziazobine sulfonate-6)]。

3.OPD氧化后的產品呈橙紅色,用酸中止酶反應后,在492nm處有最高吸收峰,靈敏度高,比色便當,是HRP結合物最常用的底物。OPD自身難溶于水,OPD?2HCL為水溶性。曾有報道OPD有致異變性,操作時應予留心。OPD見光易蛻變,與過氧化氫混組成底物運用液后更不安穩,須現裝備現用。在試劑盒中,OPD和H2O2一般分紅二組分,OPD可制成一定量的粉劑或片劑方法,片劑中含有發泡助溶劑,運用更為便當。

4.過氧化氫則配入底物緩沖液中,ELISA試劑盒有制成易保存的濃縮液,運用時用蒸餾水稀釋。先進的ELISA試劑盒中則直接配成含保護劑的作業濃度為0.02% H2O2的運用液,只需參與OPD后即可作為底物運用液。TMB經HRP作用***產品顯藍色,目視對比明顯。

5.TMB性質較安穩,可配成溶液試劑,只需與H2O2溶液混和即成運用液,可直接作底物運用。其他,TMB又有無致癌性等利益,因此在ELISA中運用日趨廣泛。酶反應用HCL或H2SO4中止后,TMB產品由藍色呈黃色,可在比色計中定量,最適吸收波長為405nm。

6.ABTS雖不如OPD和TMB靈敏,但空白值極低,也為一些試劑盒所選用。另一種HRP的底物為3-(4-羥基)苯丙酸[3-(4-hydroxy)phenly propionic acid,HPPA],經HRP作用后,產品顯熒光,可用熒光光度計測量。用于ELISA的利益為可加寬定量測定的線性規劃。

7.HRP對氫受體的專一性很高,ELISA試劑盒僅作用于H2O2、小分醇的過氧化物和尿素過氧化物(urea peroxide)。H2O2運用最多,但尿素過氧化物為固體,作為試劑較H2O2便當、安穩。試劑盒供應尿素過氧化物片劑,用蒸餾水溶解后,在底物緩沖液中密閉、低溫(2~8℃)可安穩1年。

發布者:上海澤葉生物科技有限公司
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