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武漢英科生物河豚毒素檢測(cè)試劑盒技術(shù)詳解 達(dá)國(guó)際一流水平

瀏覽次數(shù):5659 發(fā)布日期:2018-4-8  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
武漢英科生物技術(shù)有限公司開(kāi)發(fā)的河豚毒素ELISA檢測(cè)試劑盒,檢測(cè)限量達(dá)到2 ppb,在美國(guó)、日本、俄羅斯、北歐等食品企業(yè)、政府檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)廣為應(yīng)用,質(zhì)量合格率達(dá)到100%,誤差1%左右,大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)標(biāo)明,河豚毒素檢測(cè)試劑盒技術(shù)水平國(guó)際一流水平。
 
與LC-MS儀器對(duì)比試驗(yàn),結(jié)果符合率100%,批間差異小于0.1%,試劑盒穩(wěn)定高,抗干擾力強(qiáng)。
1.  ELISA標(biāo)準(zhǔn)工作曲線
按照競(jìng)爭(zhēng)性ELISA操作過(guò)程,對(duì)不同稀釋度的河豚毒素標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行測(cè)定,以各孔平均OD值與對(duì)照組的OD值比值的logit函數(shù)為縱坐標(biāo),以不同濃度河豚毒素標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果如圖所示:線性回歸方程為y=-1.9695x+3.3899,R²=0.9902;線性范圍為5-500 ng/mL,最低檢測(cè)限為5 ng/mL。
1  ELISA標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(縱坐標(biāo)不是抵制率logit(B/B0))
  
2.  回收率實(shí)驗(yàn)
添加250 ng和500 ng的河豚毒素標(biāo)準(zhǔn)品的1 g河豚魚(yú)魚(yú)肉中,通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性ELISA檢測(cè)結(jié)果如表所示:添加250 ng標(biāo)準(zhǔn)品時(shí),回收率為159%,添加500 ng標(biāo)準(zhǔn)品時(shí),回收率為108%。產(chǎn)品回收率偏高,我們分析可能是由于洗板次數(shù)太多,導(dǎo)致少量的抗體抗原脫離,或者是由于實(shí)驗(yàn)時(shí)間偏長(zhǎng),抗體的效價(jià)減弱引起。產(chǎn)品回收率偏高,不影響檢測(cè)靈敏度,由于產(chǎn)品檢測(cè)限較低(5 ng/mL),所以該產(chǎn)品可以滿足日常對(duì)河豚魚(yú)的檢測(cè)工作要求。
2模擬樣品回收率實(shí)驗(yàn)
樣品
0
250ng
500ng
河豚魚(yú)肉
ND
398ng
542.5ng
回收率%
-
159%
108%
CV%
3.7
4.3
6.2
 
3. 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
對(duì)濃度為10、50、100、150 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果如表所示:10-150 ng/mL 4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品濃度變異系數(shù)為1.93-3.77%,平均變異系數(shù)為2.76%。
 
變異系數(shù)CV %=(標(biāo)準(zhǔn)偏差SD /平均值Mean)×100%
3 穩(wěn)定性
添加 河豚毒素 標(biāo)準(zhǔn)品理論濃度(ng/mL)
溶液中TT含量(ng/mL)
10
50
100
150
1
15.43
60.17
124.80
167.18
2
12.38
57.51
122.02
174.24
3
13.32
54.86
113.49
152.26
4
12.55
56.80
117.83
167.03
5
15.48
57.00
111.84
157.33
6
12.49
60.14
116.74
164.63
平均
13.61
57.75
117.79
163.78
CV(%)
1.93
3.77
2.38
2.97
 
4. 樣品中河豚毒素的檢測(cè)
4  浙江與海南省河豚魚(yú)不同品種不同部位毒素分布情況         
樣品濃度X(μg/kg)
     
 
  品種
菊1#
菊2#
菊3#
菊4#
雙5#
雙6#
雙7#
雙8#
月腹刺鲀
ND
ND
ND
ND
60.56
ND
47.40
ND
293.83
ND
ND
ND
ND
1.33
30.09
0.57
ND
623.69
ND
ND
ND
ND
41.30
89.63
22.46
ND
1034.34
ND
ND
ND
ND
15.89
13.61
89.57
24.34
275.70
ND
ND
ND
ND
5.72
114.02
102.93
107.4
970.70
ND
ND
0.875
ND
5.56
43.91
52.83
ND
636.39
ND
ND
ND
ND
5.35
49.37
67.16
20.77
97.75
ND
ND
ND
ND
2.14
6.75
87.55
0.87
312.36
ND
ND
ND
ND
133.93
51.43
ND
20.73
176.74
ND
ND
ND
ND
11.57
81.78
50.19
35.67
254.21
ND
ND
ND
ND
48.30
7.57
54.78
8.25
197.55
ND
ND
ND
ND
2.56
ND
87.73
20.29
N
ND
ND
ND
ND
ND
113.30
50.89
3
46.7
ND
ND
ND
ND
ND
15.86
39.54
ND
45.75
ND
ND
ND
ND
ND
ND
20.09
20.09
59.27
性腺
ND
5.96
ND
ND
ND
ND
32.58
12.5
399.82
 
方法依據(jù):GBT 5009.206-2007 鮮河豚魚(yú)中河豚毒素的測(cè)定
 
計(jì)算公式:X=C×D×V/m
         X:樣品中河豚毒素含量,單位為微克每千克(μg/kg)
         C:酶標(biāo)板上測(cè)的河豚毒素含量,單位為納克每毫升(ng/mL)
         D:樣品稀釋倍數(shù)
         V:提取溶液的定容體積,單位為毫升(mL)
         m:檢測(cè)樣品的質(zhì)量,單位為克(g)
 
關(guān)于河豚魚(yú)的毒性,一般分為4個(gè)毒力等級(jí):毒性高于1000 MU/g為劇毒級(jí);介于100 MU/g~1000 MU/g之間為強(qiáng)毒級(jí);介于10 MU/g~100 MU/g之間為弱毒級(jí);低于10 MU/g為無(wú)毒級(jí)(無(wú)毒級(jí)中使小鼠致死的情況可視為微毒級(jí))。據(jù)張理對(duì)鼠單位的定義 (1 MU=0.22 μg)。
 
根據(jù)上述方法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得出回歸方程(y=a×x-b)。其中 a、b為系數(shù),y為抑制率(A0-A /A0%),x為L(zhǎng)og(100*河豚毒素濃度)。根據(jù)樣品的OD490 (A)值計(jì)算抑制率,再根據(jù)公式計(jì)算出河豚毒素的濃度。結(jié)果上表所示:河豚毒素在浙江與海南省常見(jiàn)河豚魚(yú)的種類(lèi)分布差異顯著,菊黃東方鲀未檢測(cè)出毒性,屬于無(wú)毒級(jí)別;雙斑東方鲀雖有檢測(cè)出毒性但也屬于無(wú)毒級(jí)別,其中雄性雙斑東方鲀的脾臟和胃毒力高于雌性;野生月腹刺鲀的毒力明顯高于養(yǎng)殖品種。
發(fā)布者:武漢英科生物技術(shù)有限公司
聯(lián)系電話:027-87745856
E-mail:info@ecalbio.com

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