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武漢伊萊瑞特教你ELISA實驗樣本處理方法

瀏覽次數:3873 發布日期:2018-7-6  來源:www.elabscience.cn

   可用于ELISA實驗的樣本一般有血清、血漿、尿液、細胞培養上清以及組織勻漿等。不同樣本類型的預處理方法也不同。適當的樣本預處理是確保ELISA實驗正確性和準確性的第一步。這里,我們將介紹幾種不同樣本類型的處理方法。

1. 血清

血清是ELISA實驗最常用的樣本,其預處理也十分簡單。

使用無熱原無內毒素的試管或離心管采集血液樣本,將試管或離心管在室溫下放置2小時或4℃過夜,分離出血清(建議傾斜試管或離心管以擴大液面的橫截面,使血清可以更大程度地分離出來)。4℃下以1000×g離心20分鐘,小心收集上清液(血清),立即進行測定。建議在-20℃或-80℃下將收集的血清分裝保存,避免反復凍融。

在收集血液樣本的過程中應避免溶血,因為紅細胞在溶解時會釋放具有過氧化物酶活性的物質,這種情況下,ELISA實驗中將會出現非特異性顯色反應,導致檢測結果不準確,出現假陽性結果。另外,樣本還應避免細菌污染,因為細菌可能含有內源性HRP,也會導致檢測結果不準確。

2. 血漿

使用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液樣本,采集后30分鐘內,4℃下以1000×g離心15分鐘,小心收集上清液(血漿)。建議在-20℃或-80℃下將收集的血漿分裝保存,避免反復凍融。樣本應避免溶血或高血脂。常見的抗凝劑包括EDTA,肝素鈉,枸櫞酸鈉等。檢測前請仔細閱讀ELISA試劑盒說明書,查看該試劑盒針對抗凝劑是否有特殊要求。

3. 細胞培養上清

將細胞培養上清液吸入離心管中并以1000×g離心20分鐘,除去細胞碎片和雜質,收集上清液備用,樣本保存在-20℃或-80℃,避免反復凍融。

4. 細胞

反復凍融方法

1) 吸出培養板中的培養基,用胰蛋白酶消化細胞,然后加入適量的培養基將培養板上的細胞沖洗干凈。懸浮細胞可以省略該步驟。

2) 將細胞懸浮液收集到離心管中,以1000×g離心10分鐘,然后吸去培養基,用預冷PBS洗滌細胞3次。

3) 加入適量的預冷PBS(建議在使用前立即加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。在6孔培養板中,每個孔需要150-250μL的PBS來重懸細胞。

4) 使樣本在-20℃或-80℃條件和室溫條件下反復凍融,重復凍融過程數次,直至細胞完全裂解。也可以使用超聲波細胞破碎器超聲處理懸浮液來裂解細胞。

5) 4℃下以10,000×g離心10分鐘,去除細胞碎片,收集上清液, -20℃或-80℃保存,避免反復凍融。

5. 組織勻漿

1) 用預冷的PBS(0.01M,PH7.4)沖洗組織以除去表面殘留的血液或雜質。

2) 將組織塊稱重,然后切成盡可能小的碎塊,以便充分勻漿。

3) 加入適量的預冷PBS(體積取決于組織的重量,9 mL PBS適用于1 g組織,建議使用前立即在PBS中加入適量蛋白酶抑制劑),用玻璃勻漿器在冰上或冰浴中充分勻漿。

4) 將勻漿液吸入離心管中,4℃ 下以5000×g離心5~10分鐘,收集上清液,保存至-20℃或-80℃,避免反復凍融。

6. 尿液、唾液及其他生物體液

以1000×g離心20分鐘,收集上清液,立即進行測定。

    一般來說,由于ELISA實驗只能檢測可溶性蛋白質的含量,因此要求樣本應清晰透明并離心除去沉淀物或懸浮物質。為確保實驗的準確性, -20℃或-80℃保存的樣本應在1-6個月內完成檢測,4℃保存的樣本在一周內完成檢測。此外,樣本中不能含有會抑制HRP活性的NaN3,否則會造成假陰性結果。

發布者:武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司
聯系電話:400-999-2100
E-mail:marketing@elabscience.cn

標簽: ELISA
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