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如何使用生物素標記抗體或蛋白

瀏覽次數(shù):494 發(fā)布日期:2018-7-17 

生物素,是一個分子量只有244.31Da的小分子,經活化后可與蛋白、抗體等生物大分子結合,不僅可以很好地保持大分子的生物活性,而且與親和素結合使用時具有多級放大作用,使其廣泛應用于微量抗原、抗體定性、定量檢測及定位觀察研究。

那么如何使用生物素標記抗體或蛋白呢?下面給大家分享一下。

工具/原料
• 10ul,50ul,200ul,1000ul可調高精度移液器
• 恒溫箱(37℃)
• 離心機(離心力可達到12,000×g)
• 生物素標記試劑盒(Cata.No:EBLK0002, Elabscience)

實驗前準備
1.仔細閱讀使用說明書。
2.計算待使用NH2-Reactive Biotin的量。
3.提前20min從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫(注:不需要用到的NH2-Reactive Biotin繼續(xù)放置冰箱中)。
4.溶解NH2-Reactive Biotin:加入30ulDMF至NH2-ReactiveBiotin瓶中,靜置10min,待其充分溶解,此時生物素的濃度為10mM。

操作步驟:(本操作步驟按照1mg的量進行標記)

1.取1mg待標記抗體于Filtration tube中,并加入相應體積的Labeling Buffer,使抗體的終濃度為2mg/ml,12,000 x g離心10min。(注:①Filtration tube的最大體積為0.5ml②待標記抗體濃度低時,可先超濾離心一次)

2. 加入13.3ul NH2-Reactive Biotin 和適量Labeling Buffer至上述Filtration tube中,使終體積為0.5ml,并輕輕吹打混勻。放入37℃恒溫箱中避光溫育30min。12,000 x g離心10min。

3. 加入適量Labeling Buffer至上述Filtration tube中,使終體積為0.5ml,并輕輕吹打混勻,12,000 x g離心10min。

4. 操作3重復一次。

5. 加0.2ml Labeling Buffer至Filtration tube中,輕輕吹打。將濾芯倒轉放置于另一個離心管中,6,000 x g離心10min。

6. 收集離心管中的溶液,即為生物素標記的抗體。

發(fā)布者:武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司
聯(lián)系電話:400-999-2100
E-mail:marketing@elabscience.cn

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