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夾心法ELISA和競爭法ELISA操作步驟比較

瀏覽次數:9327 發布日期:2018-7-23  來源:www.elabscience.cn

競爭法ELISA操作步驟

實驗開始前,各試劑和樣本均應平衡至室溫;樣本復融后需再次離心,取上清檢測;試劑或樣本配制時,需充分混勻并盡量避免起泡;標曲和樣本建議做復孔檢測。

1.加樣:將標準品工作液依次加入到前兩列孔中,每個濃度的工作液并列加兩孔,每孔50 μL。待測樣品加入到其他孔,每孔50 μL(若樣本濃度高于檢測范圍,需用標準品&樣本稀釋液稀釋后取樣)。立即每孔加入配好的生物素化抗體工作液50 μL。混勻,給酶標板覆膜,37℃孵育45分鐘。提示:加樣時將樣品加于酶標板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,避免產生氣泡。加樣時間宜控制在10分鐘內。
2.洗滌:甩盡孔內液體,每孔加洗滌液350 μL,浸泡1-2分鐘,吸去或甩掉酶標板內的液體,在厚的吸水紙上拍干。重復此洗板步驟3次。提示:此處與其他洗板步驟都可用洗板機。每一步洗滌充分是實驗的根本。
3.HRP酶結合物:每孔加酶結合物工作液100 μL,混勻,加上覆膜,37℃孵育30分鐘。
4.洗滌:棄去孔內液體,洗板5次,方法同步驟2。
5.底物:每孔加底物溶液(TMB) 90 μL,混勻,加上覆膜,37℃避光孵育15分鐘左右。提示:根據實際顯色情況酌情縮短或延長孵育時間,但不可超過30分鐘。當標準孔出現明顯梯度時,即可終止。
6.終止:每孔加終止液50 μL,終止反應。提示:終止液的加入順序應盡量與底物溶液的加入順序相同。
7.讀值:立即用酶標儀在450 nm波長測量各孔的光密度(OD值)。應提前打開酶標儀預熱,設置好檢測程序。
8. 實驗完畢后,將未用完的試劑按規定的保存溫度放回冰箱保存至保質期。

 

夾心法ELISA操作步驟 

實驗開始前,各試劑和樣本均應平衡至室溫;樣本復融后需再次離心,取上清檢測;試劑或樣本配制時,需充分混勻并盡量避免起泡;標曲和樣本建議做復孔檢測。
 

1.加樣:將標準品工作液依次加入到前兩列孔中,每個濃度的工作液并列加兩孔,每孔100 μL。待測樣品加入到其他孔,每孔100 μL(若樣本濃度高于檢測范圍,需用標準品&樣本稀釋液稀釋后取樣)。給酶標板覆膜,37℃孵育90分鐘。提示:加樣時將樣品加于酶標板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,避免產生氣泡。加樣時間宜控制在10分鐘內。
2.生物素化抗體/抗原:棄去液體,甩干,不用洗滌。每個孔中立即加入生物素化抗體/抗原工作液100 μL,混勻,酶標板加上覆膜, 37℃孵育1小時。
3.洗滌:甩盡孔內液體,每孔加洗滌液350 μL,浸泡1-2分鐘,吸去或甩掉酶標板內的液體,在厚的吸水紙上拍干。重復此洗板步驟3次。提示:此處與其他洗板步驟都可用洗板機。每一步洗滌充分是實驗的根本。
4.HRP酶結合物:每孔加酶結合物工作液100 μL,混勻,加上覆膜,37℃孵育30分鐘。
5.洗滌:棄去孔內液體,洗板5次,方法同步驟3。
6.底物:每孔加底物溶液(TMB) 90 μL,混勻,加上覆膜,37℃避光孵育15分鐘左右。提示:根據實際顯色情況酌情縮短或延長孵育時間,但不可超過30分鐘。當標準孔出現明顯梯度時,即可終止。
7.終止:每孔加終止液50 μL,終止反應。提示:終止液的加入順序應盡量與底物溶液的加入順序相同。
8.讀值:立即用酶標儀在450 nm波長測量各孔的光密度(OD值)。應提前打開酶標儀預熱,設置好檢測程序。
9.實驗完畢后,將未用完的試劑按規定的保存溫度放回冰箱保存至保質期。

發布者:武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司
聯系電話:400-999-2100
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