膿腫分枝桿菌參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有哪五種即引物
瀏覽次數(shù):334 發(fā)布日期:2021-3-24
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膿腫分枝桿菌參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以最低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
CMP 胞苷 5’-單磷酸英文名(EN):H-Gly-Pro-PNA?P-tosylateCAS No.:65094-46-0規(guī)格(SP):1G類別(Key):通用試劑
Congo red 剛果紅英文名(EN):Zinc Glycinate,≥99.0%CAS No.:1941118規(guī)格(SP):500G類別(Key):通用試劑
Coomassie brilliant blue G-250 考馬斯亮蘭G-250英文名(EN):Chromotrope 2RCAS No.:839148規(guī)格(SP):1G類別(Key):通用試劑
Coomassie brilliant blue R-250 考馬斯亮蘭R-250英文名(EN):Magnesium Glycinate,99%CAS No.:14783-68-7規(guī)格(SP):500G類別(Key):通用試劑
CPPU 氯吡苯脲英文名(EN):Calcium Glycinate,≥99.0%CAS No.:35947-07-0規(guī)格(SP):100G類別(Key):通用試劑
Cresol Red 甲酚紅英文名(EN):3-Aminobutanoic acid,97%CAS No.:541-48-0規(guī)格(SP):5G類別(Key):通用試劑
CrP 磷酸肌酸鈉鹽英文名(EN):DL-Arginine hydrochloride,≥98%CAS No.:32042-43-6規(guī)格(SP):1G類別(Key):通用試劑
Crystal Violet 結(jié)晶紫英文名(EN):L-Arginine L-glutamate saltCAS No.:4320-30-3規(guī)格(SP):25G類別(Key):通用試劑
CTAB英文名(EN):Phenol Red sodium salt,90%CAS No.:34487-61-1規(guī)格(SP):5G類別(Key):通用試劑
CTP 5’-三磷酸胞苷二鈉英文名(EN):Diazo Red RCCAS No.:68025-25-2規(guī)格(SP):25G類別(Key):通用試劑