Calcein AM細胞增殖與毒性檢測試劑盒操作規(guī)程
Calcein AM細胞增殖與毒性檢測試劑盒操作規(guī)程
、在96孔板加入細胞00μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入00微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入00微升5000～0000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及00%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（完全培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（完全培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×00
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時的藥物濃度(IC90)
、在96孔板加入細胞00μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入00微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入00微升5000～0000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及00%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（完全培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（完全培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×00
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時的藥物濃度(IC90)
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