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質譜MRM(多反應監測)與iTRAQ/TMT定量方法分析對比

瀏覽次數:360 發布日期:2024-1-13  來源:百泰派克生物科技

1.引言

生物藥物研究領域中,蛋白質定量是一項重要的任務。準確地測量蛋白質的表達水平對于了解疾病機制、藥物研發以及生物標記物的發現具有關鍵意義。在蛋白質組學研究中,質譜技術是一種常用的方法。本文將重點介紹質譜MRM(多反應監測)與iTRAQ/TMT定量兩種常見的蛋白質組學定量方法,并對其進行對比分析。
 

2.質譜MRM定量

質譜MRM是一種基于質譜技術的定量方法,它通過選擇特定的肽段和轉換反應離子對(transition)來實現對目標蛋白質的定量。首先,通過質譜技術對樣品進行分析,獲得肽段的質譜譜圖。然后,選擇特定的肽段和其對應的轉換反應離子對進行監測。通過測量這些離子對的峰面積,可以推斷出目標蛋白質的含量。

質譜MRM定量方法具有高靈敏度、高選擇性和高通量的特點。它可以同時監測多個肽段,從而實現對多個蛋白質的定量。此外,質譜MRM定量方法還可以通過穩定同位素標記技術(如15N標記)來實現絕對定量,提高定量結果的準確性。
 

3.iTRAQ/TMT定量

iTRAQ(同位素標記化反應標記)和TMT(同位素標記化標記)是兩種常用的蛋白質組學定量方法。它們通過在樣品中引入特定的同位素標記化試劑,將不同樣品的蛋白質進行標記,然后將標記的樣品混合在一起進行質譜分析。

iTRAQ和TMT定量方法具有高通量、高復現性和高靈敏度的特點。它們可以同時定量多個樣品,從而實現高通量的蛋白質組學研究。此外,iTRAQ和TMT定量方法還可以通過選擇性地標記特定的氨基酸殘基(如精氨酸和賴氨酸)來實現定量的精確性。

4..質譜MRM與iTRAQ/TMT定量的對比

 

質譜MRM和iTRAQ/TMT定量方法在蛋白質組學研究中都具有重要的應用價值,但它們也存在一些差異。

首先,質譜MRM定量方法具有更高的靈敏度和選擇性。它可以選擇性地監測目標肽段,從而避免了復雜樣品中其他干擾物質的影響。相比之下,iTRAQ/TMT定量方法需要對整個樣品進行質譜分析,可能會受到復雜樣品基質的干擾。

其次,質譜MRM定量方法適用于定量少量目標蛋白質的情況。它可以選擇性地監測目標肽段,從而實現對少量目標蛋白質的定量。相比之下,iTRAQ/TMT定量方法適用于同時定量多個樣品的情況,但對于少量目標蛋白質的定量可能不夠準確。

最后,質譜MRM定量方法可以實現絕對定量,提高定量結果的準確性。通過穩定同位素標記技術,可以將質譜MRM定量結果與已知濃度的標準品進行比較,從而實現絕對定量。相比之下,iTRAQ/TMT定量方法只能實現相對定量,無法得到絕對定量結果。

5.結論

 

質譜MRM和iTRAQ/TMT定量方法是生物藥物研究領域中常用的蛋白質組學定量方法。質譜MRM定量方法具有高靈敏度、高選擇性和高通量的特點,適用于定量少量目標蛋白質的情況。iTRAQ/TMT定量方法具有高通量、高復現性和高靈敏度的特點,適用于同時定量多個樣品的情況。在選擇定量方法時,需要根據實驗的具體需求和樣品特點進行選擇。

圖1

發布者:北京百泰派克生物科技有限公司
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