AbMole Calcein-AM/PI雙染試劑盒的檢測原理及優勢
細胞生物學研究中，細胞活性檢測是基礎且關鍵的實驗環節。然而，傳統方法在檢測活細胞和死細胞時常常面臨諸多挑戰：例如，檢測過程復雜、耗時，容易受到細胞類型和實驗條件的限制；熒光信號不穩定，難以準確區分活細胞和死細胞；或者需要昂貴的設備支持，增加了實驗成本。這些問題不僅影響實驗效率，還可能導致結果偏差，給科研人員帶來諸多困擾。AbMole的Calcein-AM/PI活死細胞雙染試劑盒（AbMole，M55257），專為解決這些痛點而設計，它的檢測原理基于兩種熒光染料：Calcein-AM和碘化丙啶（PI），能夠快速、準確地區分活細胞和死細胞，為細胞活性檢測提供了一種高效、便捷且可靠的解決方案。AbMole為全球科研客戶提供高純度、高生物活性的抑制劑、細胞因子、人源單抗、天然產物、熒光染料、多肽、靶點蛋白、化合物庫、抗生素等科研試劑，全球大量文獻專利引用。
檢測原理
Calcein-AM/PI活死細胞雙染試劑盒（AbMole，M55257）內含有Calcein-AM和Propidium Iodide（PI，碘化丙啶），Calcein AM 是在傳統的鈣黃綠素（Calcein）上添加了乙酰甲氧基甲酯即（AM）基團，導致其具有較強的疏水性，因此容易穿過細胞膜進入胞內。Calcein AM本身無熒光，在進入細胞后被細胞中內源性酯酶水解，生成具有強負電荷且不能通過細胞膜的極性分子Calcein并滯留在細胞內，而Calcein可發出強綠色熒光（Ex/Em= 494nm/517nm）[1]。由于死細胞缺乏上酯酶，不能或很少能產生Calcein，因此僅活細胞會被染色為強綠色熒光，死細胞不能被染色。PI則是一種無法透過活細胞膜的染料，由于死細胞的細胞膜選擇透過性喪失，PI可以進入胞內與雙鏈DNA特異性結合產生強烈的紅色熒光（Ex/Em=535nm/617nm），從而對死細胞進行標記[2]。因此，上述兩種染料的聯合使用，可以對活細胞與死細胞同時進行雙重熒光染色，用于實驗中細胞活性或細胞毒性的檢測。用490nm激發時可用熒光顯微鏡同時觀察活細胞和死細胞；而用545nm激發時僅可觀察到死細胞。2014年，AbMole的兩款抑制劑分別被西班牙國家心血管研究中心和美國哥倫比亞大學用于動物體內實驗，相關科研成果發表于頂刊 Nature 和 Nature Medicine。
圖1. 活死細胞染色試劑盒的檢測原理
優勢
AbMole的Calcein-AM/PI活死細胞雙染試劑盒（AbMole，M55257）具有多種優勢，主要包括以下幾點：
- 1.快速檢測：操作簡單，染色過程僅需40分鐘左右，無需復雜的前處理步驟，大大節省了實驗時間。
- 2.高靈敏度：Calcein-AM和PI的熒光信號清晰明亮，能夠準確區分活細胞和死細胞，即使在細胞密度較低的情況下也能獲得可靠的檢測結果。
- 3.廣泛適用性：適用于多種細胞類型，包括貼壁細胞、消化后的懸浮細胞以及原代細胞，不受細胞種類限制。對設備要求較低，普通熒光顯微鏡或者使用酶標儀即可完成檢測，降低了實驗成本。
- 4.穩定可靠：試劑穩定性高，熒光信號持久，不易淬滅，使實驗結果具有重復性和可靠性。
范例詳解
研究者們開發了一種無載體的“特洛伊木馬”直徑可變金屬-有機納米診療劑，通過配位驅動的超分子順序共組裝抗腫瘤抑制劑PEM、過渡金屬離子（FeIII）和血管生成抑制劑假辣木酸B（PAB）。該納米制劑可有效抑制腫瘤血管的生成。在細胞實驗中，科研人員使用了由AbMole提供的Calcein-AM/PI活死細胞雙染試劑盒（AbMole，M55257）檢測HeLa、HTdMEC 和 HUVEC 細胞的細胞活力[3]。
圖2. Fluorescence images of live/dead staining assay of HeLa and HTdMEC cells cultured with different formulations[3].
參考文獻及鳴謝
[1] HOLLó Z, HOMOLYA L, DAVIS C W, et al. Calcein accumulation as a fluorometric functional assay of the multidrug transporter [J]. Biochimica et biophysica acta, 1994, 1191(2): 384-8.
[2] NICOLETTI I, MIGLIORATI G, PAGLIACCI M C, et al. A rapid and simple method for measuring thymocyte apoptosis by propidium iodide staining and flow cytometry [J]. Journal of immunological methods, 1991, 139(2): 271-9.
[3] FAN Z, SHI D, ZUO W, et al. Trojan-Horse Diameter-Reducible Nanotheranostics for Macroscopic/Microscopic Imaging-Monitored Chemo-Antiangiogenic Therapy [J]. ACS applied materials & interfaces, 2022, 14(4): 5033-52.
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