貼壁細胞293細胞到貨脫落的處理方法
293系列細胞到貨又雙叒叕脫落？
別慌！3招拯救你的“玻璃心”細胞！
（中喬新舟細胞10X ）
293細胞作為貼壁細胞，但部分亞系（如293T、293F）因基因修飾或培養習慣，貼壁能力較弱。長途運輸導致細胞膜損傷，貼壁不穩。發貨活細胞T25瓶到貨常常會出現以下情況：
一、 遇到這樣該怎么處理?
1、若細胞已漂浮，別急著倒掉。
2、建議收到細胞后放培養箱靜止2-4h后觀察細胞是否再次恢復貼壁。
3、如果貼壁可去除培養基，輕柔pbs洗一次，加入0.25%胰酶作用2-3min鏡下觀察細胞變圓,手掌心拍打瓶尾震動細胞，顯微鏡下觀察細胞成單個，就可加含10%FBS完全培養基終止消化，輕柔吹打4-6次至細胞全成單個懸浮細胞即可。12-24小時后會有90%以上細胞會貼壁。
4、如果細胞沒有恢復貼壁，可以收集培養瓶內液體離心1000轉5min收集細胞沉淀，接種到新培養瓶，可提高血清濃度到15%。T25培養瓶建議加7ml完全培養基。
5、必要時使用多聚賴氨酸、纖連蛋白進行包被，促進細胞的延展和貼壁。
二、消化不透徹的后果
以下是客戶T25瓶細胞密度達到80%左右進行傳代，1：3傳代，加入1ml的0.25%胰酶，第二天的細胞結果圖：
1、 圖片能明顯看到細胞抱團嚴重，延展性不好 ，這是由于細胞在消化過程中沒有消化透徹，細胞脫落后沒有分散成單個細胞就終止消化導致。
2、 很多老師擔心細胞消化過度，損傷細胞，考慮到細胞既然都消化脫落了，那就可以終止消化了。
3、 其實胰酶是比較溫和的，相對外界的一次性吸管吹打，移液槍吹打。
三、如何讓您的293細胞乖乖“趴平”，狀態拉滿！
1、消化： 消化脫落后室溫延長1-2min,手掌心拍打瓶尾觀察細胞脫落情況，震動分散細胞，顯微鏡下觀察分散情況，加含10%FBS完全培養基終止消化。（T25瓶1ml胰酶3-5ml終止液）
2、減少吹打次數：在凍存或傳代過程中，細胞沉淀用手指彈松分散開再進行下一步操作，若要吹打建議用寬口移液槍頭輕柔吹散，并減少次數。避免機械損傷。
3、降低胰酶濃度：若把控不好消化時間，改用低濃度胰酶（0.05%）+ EDTA，（可用0.25%胰酶+pbs稀釋）消化時間控制在3-6分鐘。
四、優化微環境，讓細胞“穩如泰山”
1、溫柔復蘇，給細胞“緩沖期”
· 37℃水浴解凍后，逐滴加入預溫培養基（1mL凍存液+3-5mL培養基），減少滲透壓沖擊。
· 1000 rpm × 5分鐘，避免細胞團機械損傷。去除培養基，用手指彈松細胞團塊后進行補液分瓶。
· 24小時不擾動，接種后靜置培養，別手癢急著觀察細胞。
2、貼壁性不好，如何改善？
· 用0.1%明膠（4h以上或過夜）或多聚賴氨酸（10 μg/mL，4h以上或過夜）預處理，增強細胞吸附。
· 優先用優質胎牛血清（FBS），批次差異大的可提前測試促貼壁效果。提高血清濃度，刺激細胞生長。
· 或可添加1-2 mM 谷氨酰胺或非必需氨基酸（NEAA），提供額外營養支持。
293細胞雖“嬌氣”，但只要掌握好消化技巧+溫柔操作+優化環境的技巧，就能讓它“穩如老狗”！趕緊試試這些方法，讓你的實驗不再被細胞脫落“卡脖子”！
別慌！3招拯救你的“玻璃心”細胞！
（中喬新舟細胞10X ）
293細胞作為貼壁細胞，但部分亞系（如293T、293F）因基因修飾或培養習慣，貼壁能力較弱。長途運輸導致細胞膜損傷，貼壁不穩。發貨活細胞T25瓶到貨常常會出現以下情況：
一、 遇到這樣該怎么處理?
1、若細胞已漂浮，別急著倒掉。
2、建議收到細胞后放培養箱靜止2-4h后觀察細胞是否再次恢復貼壁。
3、如果貼壁可去除培養基，輕柔pbs洗一次，加入0.25%胰酶作用2-3min鏡下觀察細胞變圓,手掌心拍打瓶尾震動細胞，顯微鏡下觀察細胞成單個，就可加含10%FBS完全培養基終止消化，輕柔吹打4-6次至細胞全成單個懸浮細胞即可。12-24小時后會有90%以上細胞會貼壁。
4、如果細胞沒有恢復貼壁，可以收集培養瓶內液體離心1000轉5min收集細胞沉淀，接種到新培養瓶，可提高血清濃度到15%。T25培養瓶建議加7ml完全培養基。
5、必要時使用多聚賴氨酸、纖連蛋白進行包被，促進細胞的延展和貼壁。
二、消化不透徹的后果
以下是客戶T25瓶細胞密度達到80%左右進行傳代，1：3傳代，加入1ml的0.25%胰酶，第二天的細胞結果圖：
1、 圖片能明顯看到細胞抱團嚴重，延展性不好 ，這是由于細胞在消化過程中沒有消化透徹，細胞脫落后沒有分散成單個細胞就終止消化導致。
2、 很多老師擔心細胞消化過度，損傷細胞，考慮到細胞既然都消化脫落了，那就可以終止消化了。
3、 其實胰酶是比較溫和的，相對外界的一次性吸管吹打，移液槍吹打。
三、如何讓您的293細胞乖乖“趴平”，狀態拉滿！
1、消化： 消化脫落后室溫延長1-2min,手掌心拍打瓶尾觀察細胞脫落情況，震動分散細胞，顯微鏡下觀察分散情況，加含10%FBS完全培養基終止消化。（T25瓶1ml胰酶3-5ml終止液）
2、減少吹打次數：在凍存或傳代過程中，細胞沉淀用手指彈松分散開再進行下一步操作，若要吹打建議用寬口移液槍頭輕柔吹散，并減少次數。避免機械損傷。
3、降低胰酶濃度：若把控不好消化時間，改用低濃度胰酶（0.05%）+ EDTA，（可用0.25%胰酶+pbs稀釋）消化時間控制在3-6分鐘。
四、優化微環境，讓細胞“穩如泰山”
1、溫柔復蘇，給細胞“緩沖期”
· 37℃水浴解凍后，逐滴加入預溫培養基（1mL凍存液+3-5mL培養基），減少滲透壓沖擊。
· 1000 rpm × 5分鐘，避免細胞團機械損傷。去除培養基，用手指彈松細胞團塊后進行補液分瓶。
· 24小時不擾動，接種后靜置培養，別手癢急著觀察細胞。
2、貼壁性不好，如何改善？
· 用0.1%明膠（4h以上或過夜）或多聚賴氨酸（10 μg/mL，4h以上或過夜）預處理，增強細胞吸附。
· 優先用優質胎牛血清（FBS），批次差異大的可提前測試促貼壁效果。提高血清濃度，刺激細胞生長。
· 或可添加1-2 mM 谷氨酰胺或非必需氨基酸（NEAA），提供額外營養支持。
293細胞雖“嬌氣”，但只要掌握好消化技巧+溫柔操作+優化環境的技巧，就能讓它“穩如老狗”！趕緊試試這些方法，讓你的實驗不再被細胞脫落“卡脖子”！
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