YIJI藍色熒光細胞核染色分析試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

YIJI藍色熒光細胞核染色分析試劑是一種旨在通過使用熒光染料DAPI與細胞核DNA特異性結合，并發出熒光檢測信號，用于分析和觀察細胞核形態或DNA含量以及雙重染色或重疊染色定位的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細胞核（動物、人體、植物、昆蟲等）的觀察。產品即到即用，性能穩定，熒光清晰。

技術背景

作為細胞DNA染色劑之一的4,6-二咪基－4-聯苯基吲哚（4,6-diamidino-2-phenylindole；DAPI）特異性地與DNA雙螺旋的凹槽部分發生相互作用，從而與DNA的雙鏈緊密結合。結合后產生的熒光基團的吸收峰是358nm而散射峰是461nm，正好是UV（紫外光）的激發波長356nm，使得DAPI成為一種常用的熒光檢測信號，并作為雙重染色或重疊染色的主要染色劑之一。

產品內容

YIJI清理液（Reagent A）     200毫升

YIJI固定液（Reagent B） 50毫升

YIJI擴張液（Reagent C） 50毫升

YIJI染色液（Reagent D） 20毫升

YIJI抗淬滅劑（Reagent E）  5毫升

產品說明書            1份

保存方式

保存YIJI固定液（Reagent B）、YIJI染色液（Reagent D）和YIJI抗淬滅劑（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；YIJI染色液（Reagent D）和YIJI抗淬滅劑（Reagent E）避免光照；有效保證6月

用戶自備

微型臺式離心機：用于懸浮細胞的操作

蓋玻片：用于染色后封片

熒光顯微鏡：用于觀察細胞核DNA染色

實驗步驟

• 貼壁細胞染色
• 準備1個細胞培養24孔板的待測細胞，每孔鋪滿率達70％

（注意：可以使用載玻片，載玻片培養皿，35mm培養皿，和其它培養孔板，見注意事項6）

• 小心抽掉細胞培養液
• 小心加入500微升YIJI清理液（Reagent A）
• 小心抽掉YIJI清理液（Reagent A） 
• 小心沿著孔壁加入500微升－20℃預冷的YIJI固定液（Reagent B）， 覆蓋培養孔表面
• 在4℃冰箱里孵育6分鐘
• 小心抽掉YIJI固定液（Reagent B）
• 小心沿著孔壁加入500微升YIJI清理液（Reagent A），覆蓋培養孔表面
• 在室溫下孵育5分鐘
• 小心抽掉500微升YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加入500微升YIJI通透液（Reagent C），覆蓋培養孔表面
• 在室溫下孵育5分鐘
• 小心抽掉500微升YIJI通透液（Reagent C）
• 小心加入500微升 YIJI清理液（Reagent A），覆蓋培養孔表面
• 小心抽掉500微升YIJI清理液（Reagent A），空氣中晾干

（注意：由此步驟開始，用戶可以進行抗體熒光染色或其它熒光染色）

• 小心加入200微升YIJI染色液（Reagent D），覆蓋培養孔表面
• 室溫下孵育10分鐘，避免光照
• 小心抽掉200微升YIJI染色液（Reagent D）
• 小心加入500微升 YIJI清理液（Reagent A），覆蓋培養孔表面
• 即刻在倒置熒光顯微鏡下進行觀察：激發波長350nm，散發波長460nm（細胞核呈現藍色）

懸浮細胞染色

• 將懸浮細胞（1 X 10⁶細胞）移入到1.5毫升離心管
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 小心加入500微升YIJI清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉YIJI清理液（Reagent A） 
• 輕輕指彈，松動細胞顆粒群
• 一滴一滴加入500微升－20℃預冷的YIJI固定液（Reagent B），混勻細胞顆粒群
• 在4℃冰箱里孵育6分鐘
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉YIJI固定液（Reagent B）
• 小心加入500微升YIJI清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群
• 在室溫下孵育5分鐘
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉500微升YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加入500微升YIJI通透液（Reagent C），混勻細胞顆粒群
• 在室溫下孵育5分鐘
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉500微升YIJI通透液（Reagent C）
• 小心加入500微升 YIJI清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉500微升YIJI清理液（Reagent A）

（注意：由此步驟開始，用戶可以進行抗體熒光染色或其它熒光染色）

• 小心加入200微升YIJI染色液（Reagent D），混勻細胞顆粒群
• 室溫下孵育10分鐘，避免光照
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉200微升YIJI染色液（Reagent D）
• 小心加入400微升 YIJI清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉400微升YIJI清理液（Reagent A）
• 小心抽掉100微升YIJI清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群
• 移出5微升到載玻片上，放上蓋玻片
• 即刻在熒光顯微鏡下進行觀察：激發波長350nm，散發波長460nm（細胞核呈現藍色）

載玻片染色

• 準備1個細胞載玻片
• 小心加上100微升YIJI清理液（Reagent A）
• 小心抽掉YIJI清理液（Reagent A） 
• 小心加上100微升－20℃預冷的YIJI固定液（Reagent B）， 覆蓋載玻片表面
• 在4℃冰箱里孵育6分鐘
• 小心抽掉YIJI固定液（Reagent B）
• 小心加上100微升YIJI清理液（Reagent A），覆蓋載玻片表面
• 在室溫下孵育5分鐘
• 小心抽掉100微升YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加上100微升YIJI通透液（Reagent C），覆蓋載玻片表面
• 在室溫下孵育5分鐘
• 小心抽掉100微升YIJI通透液（Reagent C）
• 小心加上100微升 YIJI清理液（Reagent A），覆蓋載玻片表面
• 小心抽掉100微升YIJI清理液（Reagent A），空氣中晾干
• 重復實驗步驟13至14一次

（注意：由此步驟開始，用戶可以進行抗體熒光染色或其它熒光染色）

• 小心加上100微升YIJI染色液（Reagent D），覆蓋載玻片表面
• 室溫下孵育10分鐘，避免光照
• 小心抽掉100微升YIJI染色液（Reagent D）
• 小心加上100微升 YIJI清理液（Reagent A），覆蓋載玻片表面
• 小心抽掉100微升YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加上50微升 YIJI抗淬滅液（Reagent E）
• 蓋上蓋玻片
• 即刻在熒光顯微鏡下進行觀察：激發波長350nm，散發波長460nm（細胞核呈現藍色）

注意事項

• 本產品為100次（4個24孔培養板）和200次（載玻片）操作規格
• 本產品友好使用于雙重染色或重疊染色
• YIJI染色液（Reagent D）為半通透性染料
• 操作時須戴手套
• 操作時，避免污染母液
• 本產品適合各種規格的培養細胞：載玻片，載玻片培養皿，35mm培養皿，和各種培養孔板，須相應調整試劑溶液：

• 本產品可用于懸浮細胞或細胞脫離處理后染色
• 本公司提供系列細胞核染色分析試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定熒光清晰