Sanger測序服務——BAC末端測序
詳細描述:
細菌人工染色體(Bacterial Artificial Chromosome,BAC)文庫的構建是進行基因組研究的一項重要基礎性工作,特別是對大基因組及超大基因組生物來說更是如此,在物理作圖、基因圖位克隆、基因結構和調控等研究中發揮了重要作用。BAC末端測序技術通過測定插入片段兩端的序列,能夠迅速而精確地進行序列拼裝,并確定基因組序列結構的多態性,如倒置和易位等,在基因組全序列測序中有著舉足輕重的作用。
BAC末端測序難點
一般來說,BAC測序比質;騊CR產物的測序要困難得多。主要難點體現在以下幾個方面:
1. BAC質粒插入片段長(一般大于100 Kb),容易形成二級結構,而二級結構區域后的DNA鏈可能會因延伸不夠充分而造成測序異常。
2. BAC測序需要毫克級高純度的DNA,從而獲得充足信號,以利于準確的堿基信號檢出和最大讀長的獲得。但是BAC質粒在細菌中為單拷貝或低拷貝,DNA提取和純化難度很大。
3. 測序反應完成后,產物需進行純化才能上機(ABI3730xl)檢測。常規的純化方法不能夠完全去除殘留的熒光染料,這會導致序列彩圖中出現嚴重的干擾峰。
美吉優勢
1. DNA提取環節
利用自主研發的BAC克隆DNA提取試劑和獨特的提取方法,美吉生物可以利用96孔深孔板進行BAC克隆的培養和批量化DNA提取,獲得的BAC DNA的質量和純度完全滿足測序需求。
2. 測序反應環節
對測序反應體系進行了優化,在反應體系中添加了以MgCl2為主要成分的自制緩沖液,增加了BigDye中Taq酶的活性,從而極大提高了測序的質量和成功率。
3. 測序反應純化環節
采用BigDye XTerminator純化試劑盒,可穩定地去除BAC末端測序中的染料污染,從而消除了干擾峰的出現,并且能夠顯著增強測序數據的信號強度。

上圖:乙醇純化法BAC末端測序,下圖:XTerminator純化法BAC末端測序峰圖
收費標準
樣本形式
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測序周期
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價格
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Cosmid/Fosmid
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5工作日
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120元/反應
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BAC
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6工作日
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150元/反應
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bio-equip.com
上海美吉生物醫藥科技有限公司專注于新一代DNA高通量測序技術的應用和推廣、生物信息分析、臨床診斷試劑盒研發和轉化醫學研究,是上海張江高科技園區、張江藥谷重點支持企業,華東師范大學戰略合作單位。目前,美吉生物在上海、北京、廣州三個一線城市建立了實驗基地,銷售網絡遍布全國各地。
美吉生物擁有世界一流的測序平臺,在ABI3730xl常規測序平臺的基礎上,先后引進了羅氏454高通量測序平臺和Illumina高通量測序平臺,專業提供動植物基因組測序、微生物基因組測序、宏基因組測序、轉錄組測序、小RNA測序、基因表達譜分析等技術服務。
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