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Sanger測序服務——BAC末端測序
我們為您提供挑取克隆、細菌培養、BAC/COSMID/FOSMID抽提、DNA測序一整套的服務。
服務類別:測序/合成總訪問:4590
最后更新:2015-7-14半年訪問:50
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Sanger測序服務——BAC末端測序

詳細描述:
細菌人工染色體(Bacterial Artificial Chromosome,BAC)文庫的構建是進行基因組研究的一項重要基礎性工作,特別是對大基因組及超大基因組生物來說更是如此,在物理作圖、基因圖位克隆、基因結構和調控等研究中發揮了重要作用。BAC末端測序技術通過測定插入片段兩端的序列,能夠迅速而精確地進行序列拼裝,并確定基因組序列結構的多態性,如倒置和易位等,在基因組全序列測序中有著舉足輕重的作用。
 
BAC末端測序難點
一般來說,BAC測序比質;騊CR產物的測序要困難得多。主要難點體現在以下幾個方面:
1.      BAC質粒插入片段長(一般大于100 Kb),容易形成二級結構,而二級結構區域后的DNA鏈可能會因延伸不夠充分而造成測序異常。
2.      BAC測序需要毫克級高純度的DNA,從而獲得充足信號,以利于準確的堿基信號檢出和最大讀長的獲得。但是BAC質粒在細菌中為單拷貝或低拷貝,DNA提取和純化難度很大。
3.      測序反應完成后,產物需進行純化才能上機(ABI3730xl)檢測。常規的純化方法不能夠完全去除殘留的熒光染料,這會導致序列彩圖中出現嚴重的干擾峰。
 
美吉優勢
1.      DNA提取環節
利用自主研發的BAC克隆DNA提取試劑和獨特的提取方法,美吉生物可以利用96孔深孔板進行BAC克隆的培養和批量化DNA提取,獲得的BAC DNA的質量和純度完全滿足測序需求。
2.      測序反應環節
對測序反應體系進行了優化,在反應體系中添加了以MgCl2為主要成分的自制緩沖液,增加了BigDye中Taq酶的活性,從而極大提高了測序的質量和成功率。
3.      測序反應純化環節
采用BigDye XTerminator純化試劑盒,可穩定地去除BAC末端測序中的染料污染,從而消除了干擾峰的出現,并且能夠顯著增強測序數據的信號強度。


 上圖:乙醇純化法BAC末端測序,下圖:XTerminator純化法BAC末端測序峰圖

收費標準
樣本形式
測序周期
價格
Cosmid/Fosmid
5工作日
120元/反應
BAC
6工作日
150元/反應

 

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