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基因過表達腺相關病毒(AAV)包裝服務
維洛信采用三質粒共轉染的Helper-free系統在293T細胞中進行AAV的生產與包裝,并建立了完善的純化與質控方法,生產的AAV顆?芍苯討糜诟黝愺w內體外實驗。
服務類別:其他生物研發總訪問:2313
最后更新:2019-12-18半年訪問:123
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  • 服務介紹
  • 公司簡介
腺相關病毒(Adeno-associated virus, AAV)是一種無被膜、具有20面體結構的病毒,含有4.7kb的線狀單鏈DNA基因組。AAV具備宿主范圍廣、安全性高、免疫原性低、長期穩定表達等優點,是一種理想的基因治療工具,廣泛應用于各種領域的基礎研究與臨床試驗中。

基于先進的腺病毒技術平臺,維洛信現提供基因過表達AAV制備服務。我們采用三質粒共轉染的Helper-free系統在293T細胞中進行AAV的生產與包裝,并建立了完善的純化與質控方法,生產的AAV顆?芍苯討糜诟黝愺w內體外實驗。
 

腺相關病毒優勢:

1. 宿主范圍廣:可感染分裂細胞與非分裂細胞;多種亞型具有多種組織親嗜性,可以應用于神經系統、心肌、肝臟、眼睛、肌肉等定位注射。
2. 擴散性佳:體積小、滴度高,具有遠優于腺病毒與慢病毒的擴散性,可穿越血腦屏障,是優秀的神經元與膠質細胞感染工具。
3. 安全系數高:迄今未發現野生型AAV對人體致;ITR與rep/cap基因分別由獨立的質粒傳導表達,進一步去除感染風險。
4. 免疫原性低:僅4.7kb的基因組便于重組DNA技術操作,在動物實驗中局部大劑量使用極少造成非特異性反應與免疫抑制。
5. 長時穩定表達:AAV感染可介導外源基因發生低頻(<2%)定向整合,絕大多數重組AAV感染細胞后不會整合入基因組,而是在宿主細胞內形成伴隨體,因此AAV能夠介導外源基因長期、穩定的復制轉錄。
6. 穩定性好:AAV在60℃不會被滅活,能抵抗多種有機溶劑的處理(例如氯仿)

不同的AAV亞型具有不同的組織嗜親性,我們推薦根據實驗靶向的器官/細胞,選擇具有相應親和性的AAV亞型進行構建,能夠有效提高感染效率。
 

服務流程:

1. 方案溝通
2. 基因克。簩⒛康幕騝DNA(Gene of Interest)構建入我們的專有AAV轉移質粒,測序驗證
3. 病毒包裝:三質粒共轉染(轉移質粒+病毒包裝質粒+輔助質粒)入293T細胞
4. 收毒:72h孵育后分別收獲培養上清與細胞沉淀中的病毒
5. 純化濃縮:碘克沙醇梯度離心,高效的分離空衣殼病毒與細胞雜質,將具備感染力的病毒富集到90%以上;超濾濃縮
6. 質量控制:
- 多重酶切質粒鑒定
- qPCR檢測病毒滴度
- SDS-PAGE/考馬斯亮藍測定純度
- 細胞轉導檢測(帶有熒光標簽)
- HPLC/內毒素檢測/微生物檢測(高純度AAV可選)
 

包裝服務流程圖

 

交付內容:

定制AAV病毒顆粒
對照病毒(可用于轉導測試)
詳細實驗報告
 

維洛信腺相關病毒平臺:

1. 創新性AAV載體與嚴格制備工藝,力求獲取最優滴度、活性、純度與一致性的AAV產品
2. 多種AAV血清型可供選擇(AAV1, AAV2, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9...)
3. 20余種組織特異性啟動子(CMV, CamkIIα, Human Synapsin, GFAP等)與多種報告基因(EGFP、mCherry、RFP,EYFP等)可供選擇,滿足您的不同需求
4. 滴度高:維洛信可提供10^12~10^13V.G/ml及以上滴度的病毒,滿足大部分實驗的使用要求
5. 靈活生產:我們提供體外應用級別與體內應用級別各種規格的病毒(小規格、中規格、大規格)的制備服務
6. 具有競爭力的價格與貨期
 

針對不同應用方向,我們還提供以下AAV制備服務:

bio-equip.com
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