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基于國際學術界公認的標準流程，維洛信采用第三代包裝系統系統在293T細胞中進行慢病毒的生產與包裝，并建立了完善的純化和質控方法，生產的慢病毒顆粒可直接應用于各類體內體外試驗。
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| 服務商： 北京維洛信生物科技有限公司 | 查看該公司所有服務 >> |
基于國際學術界公認的標準流程，維洛信現提供介導RNA干擾的慢病毒制備服務。我們采用第三代包裝系統系統在293T細胞中進行慢病毒的生產與包裝，并建立了完善的純化和質控方法，生產的慢病毒顆粒可直接應用于各類體內體外試驗。
RNA干擾（RNA interference, RNAi）是借助雙鏈RNA（dsRNA）引發的同源mRNA高效特異性降解、導致基因沉默的現象。RNAi技術即為在靶細胞中導入外源dsRNA，生成小分子干擾RNA（siRNA）以達到特異性剔除或沉默某個基因的表達。將針對siRNA設計的shRNA裝載入慢病毒載體中，進而高效感染細胞或動物，是人工RNAi的一項主要技術。借助慢病毒的感染能力，不僅宿主細胞范圍大大擴大，shRNA也能夠更加高效、穩定的轉導入細胞，實現長期穩定的RNAi效果。
慢病毒優勢：
1. 廣泛宿主細胞：與逆轉錄載體不同，能夠感染分裂期與靜止期細胞；包膜質粒使用皰疹病毒VSVG蛋白，宿主范圍更廣，包括神經元細胞、腫瘤細胞、心肌細胞、干細胞等多種類型的細胞。
2. 極強感染能力：慢病毒載體具有極高的感染效率，尤其適用于難轉染的神經元細胞、干細胞、原代細胞和其他不分化細胞。
3. 長期穩定表達：外源基因整合入基因組，實現持久性表達，可應用于構建穩定細胞系、制備轉基因動物等。
4. 低免疫原性：體內實驗不易造成非特異性反應與免疫抑制。
5. 高安全系數：尚未發現對人的致病性，已被應用于臨床治療；采用三質粒包裝系統，去除致病基因和輔助序列，包裝質粒和載體質粒盡量降低同源性，進一步提高了生物安全性。
服務流程：
1. 方案溝通
2. 基因克隆：針對目的基因ORF設計3-4個靶點，將對應shRNA構建入我們的專有慢病毒轉移質粒，測序驗證
3. 病毒包裝：三代慢病毒包裝系統（轉移質粒pLV-MNG + 包裝質粒 + 包膜質粒）共轉染入293T細胞
4. 收毒：48 h、72 h孵育后收獲培養上清
5. 純化濃縮：超速離心+超濾， 去除雜質蛋白和DNA；根據不同要求，我們還可應用切向流過濾、離子交換層析、蔗糖梯度離心等方式進一步純化與濃縮
6. 質量控制：
- 多重酶切質粒鑒定
- p24 ELISA核心蛋白定量
- 細胞轉導檢測（帶有熒光標簽）
- qPCR檢測病毒滴度
交付內容：
定制慢病毒顆粒
對照病毒（可用于轉導測試）
詳細實驗報告
維洛信慢病毒平臺：
1. 三代慢病毒包裝系統與嚴格制備工藝，力求獲取最優滴度、活性、純度與一致性的慢病毒產品
2. 多種優化啟動子（CMV, H1, U6等）與報告基因（EGFP、mCherry、EYFP等）或藥篩基因（Neo, Puro, Hygromycin等）可供選擇，滿足您的不同需求
3. 滴度高：維洛信可提供108~109 TU/ml及以上滴度的病毒，滿足大部分實驗的使用要求
4. 靈活生產：我們提供體外應用級別與體內應用級別各種規格的病毒（小規格、中規格、大規格）的制備服務
5. 具有競爭力的價格與貨期
針對不同應用方向，我們提供以下慢病毒制備服務：
