- 基于CRISPR的基因敲除的慢病毒載體構建與包裝
維洛信提供基于CRISPR/Cas9系統的慢病毒載體構建預包裝服務，根據目的基因設計short guide RNA (sgRNA) 序列并構建入我們專有的慢病毒載體，進而斷裂DNA雙鏈，實現對基因的精確敲除。
 

慢病毒優勢：

1. 廣泛宿主細胞：與逆轉錄載體不同，能夠感染分裂期與靜止期細胞；包膜質粒使用皰疹病毒VSVG蛋白，宿主范圍更廣，包括神經元細胞、腫瘤細胞、心肌細胞、干細胞等多種類型的細胞。
2. 極強感染能力：慢病毒載體具有極高的感染效率，尤其適用于難轉染的神經元細胞、干細胞、原代細胞和其他不分化細胞。
3. 長期穩定表達：外源基因整合入基因組，實現持久性表達，可應用于構建穩定細胞系、制備轉基因動物等。
4. 低免疫原性：體內實驗不易造成非特異性反應與免疫抑制。
5. 高安全系數：尚未發現對人的致病性，已被應用于臨床治療；采用三質粒包裝系統，去除致病基因和輔助序列，包裝質粒和載體質粒盡量降低同源性，進一步提高了生物安全性。
 

服務流程：

1. 方案溝通
2. 基因克隆：將目的基因片段構建入我們的專有慢病毒轉移質粒，測序驗證
3. 病毒包裝：三代慢病毒包裝系統（轉移質粒 + 包裝質粒 + 包膜質粒）共轉染入293T細胞
4. 收毒：48 h、72 h孵育后收獲培養上清
5. 純化濃縮：超速離心+超濾， 去除雜質蛋白和DNA；根據不同要求，我們還可應用切向流過濾、離子交換層析、蔗糖梯度離心等方式進一步純化與濃縮
6. 質量控制：
- 多重酶切質粒鑒定
- p24 ELISA核心蛋白定量
- 細胞轉導檢測（帶有熒光標簽）
- qPCR檢測病毒滴度
 

交付內容：

定制慢病毒顆粒
對照病毒（可用于轉導測試）
詳細實驗報告
 

維洛信慢病毒平臺：

1. 三代慢病毒包裝系統與嚴格制備工藝，力求獲取最優滴度、活性、純度與一致性的慢病毒產品
2. 多種優化啟動子（CMV, mCMV, CAG, PGK, Ubc等）與報告基因（EGFP、mCherry、EYFP等）或藥篩基因（Neo, Puro, Hygromycin等）可供選擇，滿足您的不同需求
3. 滴度高：維洛信可提供108~109 TU/ml及以上滴度的病毒，滿足大部分實驗的使用要求
4. 靈活生產：我們提供體外應用級別與體內應用級別各種規格的病毒（小規格、中規格、大規格）的制備服務
5. 具有競爭力的價格與貨期
 

針對不同應用方向，我們提供以下慢病毒制備服務：

用于基因過表達的慢病毒制備>>
用于RNA干擾的慢病毒制備>>
用于表達/抑制microRNA的慢病毒制備>>